Pécsi Klinikánkon az alábbi biopsziákat készítjük, előzetes időpontegyeztetés alapján:
- Izombiopszia: izombetegség gyanúja esetén,
- Punch biopszia:vékon-rost neuropathia kapcsán.
- Ideg (n. suralis) biopszia: ismeretlen etiológiájú, progresszív neuropathiás tünetek esetén (pl. vasculitis)
Izombetegség gyanúja (családban halmozottan előforduló izombetegség, izomfogyás a váll, vagy combizmok területén, fokozatosan kialakuló izomgyengeség)
Izombetegségre utaló panaszok esetén (izomgörcsök, izomfogyás, izomfájdalom)
Izombetegségre utaló laboratóriumi eltérések (CK /kreatin kináz/, tejsav /Laktát/ emelkedés, EMG vizsgálat myopathiára utal, izom MRI vizsgálat)
Izomgyulladás (myositis) gyanúja esetén
Autoimmun betegség esetén, ami izom érintettséggel járhat (pl. sarcoidosis)
Polyneuropathia gyanúja esetén
Amyotrophiás lateralsclerosis (ALS) esetén, ha egyéb vizsgálatok azt bizonyítják
Gerincvelői izomsorvadás (SMA) esetén, ha genetikai vizsgálat pozitív
Myasthenia gravis esetén
Bármelyik vázizom alkalmas, általában nem a legbetegebb, hanem a kevésbé beteg izomcsoportot választjuk: felső végtagon delatizom, biceps, alsó végtagon quadriceps (comb), vagy tibialis anterior (lábszár)
Tű biopszia: Csak kis minta vételére alkalmas, biokémiai és molekuláris biológiai vizsgálatokhoz, ritkán végezzük
Nyílt biopszia: néhány mm-es minta vétele, szövettani és további (pl. biokémia, genetika) vizsgálatra alkalmas.
Felnőtteknél a biopszia helyi érzéstelenítésben, műtéti sterilitás körülményei között zajlik, általában járóbetegként végezzük. Kisgyermekeknél a Gyermekgyógyászaton történik a mintavétel, általában altatásban.
Nem szükséges speciális előkészítés. A sebészi beavatkozás általános szabályai érvényesek, azaz véralvadás gátló (pl. Syncumar, Marfarin) gyógyszereket a műtét előtt 1 héttel frakcionált heparin készítményre kell átállítani. Thrombocyta aggregáció gátló készítmények (pl. Aspirin, Asactal, ASA protect, Clpopidogrel, Zyllt, Trombex, Kerberan, stb.) szedése nem ellenjavallt, de a biopszia előtti napon és a biopszia napján célszerű kihagyni.
A beavatkozás területének fertőtlenítése
Helyi érzéstelenítő (pl. Lidocain) adása
Bőrmetszés ejtése (1.5-2 cm)
Izmok felkeresése, fascia átvágása
Izomminta eltávolítása (speciális eszközzel néhány mm-es izomdarab kicsípése, vagy szikével kimetszése), általában 2-3 mintára van szükség
Vérzéscsillapítás, fascia és bőr zárása felszívódó varrattal
Seb steril fedése
Általában nem szükséges.Célszerű a végtagot 1-2 napig kímélni, ha szükséges kötéscsere, ha szükséges fájdalomcsillapító használhatóA sebgyógyulás alatt (legalább 1 hétig) a sebet víz nem érheti.
A mintát haladéktalanul a pathológiai feldolgozás helyére kell szállítani (natív mintát, nedves kamrában szállítjuk, hogy a kiszáradást megelőzzük, de kerülni kell a minta érintkezését bármilyen folyadékkal, mert az is károsíthatja a mintát, célszerű 30-60 percen belül laboratóriumba juttatni).
Speciális esetekben, jégakkuval, hűtve több órán át is szállítható.
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit. Suspendisse varius enim in eros elementum tristique. Duis cursus, mi quis viverra ornare, eros dolor interdum nulla, ut commodo diam libero vitae erat. Aenean faucibus nibh et justo cursus id rutrum lorem imperdiet. Nunc ut sem vitae risus tristique posuere.
Folyékony nitrogénben hűtött izopentánban fagyasztjuk le és krosztátban készítünk fagyasztott metszeteket (5-10 um vastagságban). Ezek alkalmasak rutin, enzimhisztokémiai és immunhisztokémiai vizsgálatokra.
Glutáraldehides fixálást követően műgyantába ágyazzuk a mintát, amit ultramikrotómmal metszünk le, félvékony (0.5-1 um) és ultravékony metszeteket készítünk.
Egy mintadarabot folyékony nitrogénben fagyasztjuk le és folyékony nitrogénban vagy -70 fokon fagyasztva tároljuk, így alkalmas további fehérje (Western blot), biokémiai (enzim) és genetikai vizsgálatokra (pl. mitokondriális betegség gyanúja esetén).
Paraffinos beágyazást rutinszerűen nem készítünk, de ha a minták száma lehetővé teszi, akkor a szövet tartós megőrzésére alkalmas.
Hematoxilin-eozin (HE)
Módosított
Gömöri festés
PAS
Oil red
Nikotinamid adenin dinukleotid dehidrogenáz (NADH)
Szukcinát dehidrogenáz (SDH)
Citokróm c oxidáz (COX)
COX-SDH
ATP-aze (4 pH-n)
Savas foszfatáz
Alkalikus foszfatáz
Foszforiláz
Mioadenilát
Gyulladásos
Izomdystrophiás
CD3
Dystrophin (D)-1, D2, D3
CD4
Sarcoglycan-alpha, -beta, -gamma
CD8
Dystroglycan-alpha
CD20
Utrophin
CD68
Dysferlin
MHC-I (HLA-ABC)
Desmin
MHC-II (HLA-DR)
Merosin
C5b9
Collagen-VI
Myosin nehézlánc (MyH)
Calpain 3
Dysferlin
Distrophin
A perifériás idegek biopsziájának jelentősége az utóbbi időben csökkent ugyanis a statisztikák kimutatták, hogy a legtöbb esetben nem specifikus elváltozásokat találunk és mindösszesen vasculitis esetén várhatunk olyan információt az idegbiopsziától, ami a beteg kezelését jelentősen befolyásolja.
Az idei biopsziát szenzoros idegek ellen végezhetjük el azáltal, hogy ne okozzunk motoros funkciók kiesést. A beavatkozást követően szenzoros kiesés várható az ideg ellátási területén. Ennek kiküszöbölésére mikrosebészeti technikával fascicularis biopszia végezhető, azonban a minta mérete ebben az esetben korlátozhatja a diagnosztikát. Fontos megjegyezni, hogy a feldolgozás során több magasságból is célszerű metszeteket készíteni ugyanis az elváltozások nagy része nem folytonos így az álnegatív eredmény esélye magas.
Ideg biopszia leggyakrabban akkor indokolt, ha a progresszív neuropathiát látunk klinikailag, és egyéb vizsgálatokkal nem eldönthető, hogy a betegség herediter, vagy szerzett. Ezek alapján a legfőbb indikáció a szisztémás vagy nem szisztémás vasculitises neuropathia gyanúja, valamint szisztémás (immun)folyamatokhoz társuló polyneuropathia bizonyítása, mint sarcoidosis, amyloidosis.
Leggyakrabban a nervus suralis biopsziáját készítjük el a külső boka mögötti területen. Megfelelő gyakorlattal a nervus radialis superficialis biopszia is alkalmazható.
A nervus suralis biopsziát helyi érzéstelenítésben steril körülmények között készítik. A külső boka mögött felkeresik az ideget és abból 1-3 centiméteres darabot kivágnak. Alternatív lehetőség, hogy az ideget középen hosszában behasítjuk és a csak a fele kerül eltávolításra, ezzel lehetőséget biztosítunk a regenerációra, vagy megelőzzük a végleges funkció kiesést.
Az eltávolított ideig mintát 3 egyenlő részre osztjuk.
Az 1. darabot formalin fixáljuk, paraffinba beágyazzuk és ebből metszeteket készítünk fénymikroszkópos értékelésre. A metszetekből HE, módosított Gömöri, PAS, Congo festéseket készítünk.
A 2. részt glutaraldehidben fixáljuk, műgyantába ágyazzuk, majd ebből félvékony (toluidinkék festett) és ultravékony elektronmikroszkópos metszeteket készítünk.
Néhány metszetet az ozmiumos impregnálás után különválasztunk, 1-2 napos ozmium kezelést követően glicerinbe helyezzük szintén néhány napra. Az impregnálódott és fixált idegfasciculusokat mikroszkóp alatt szétválasztjuk, igy szinte egyenként tudjuk az idegrostok myelinhüvelyének integritását értékelni. Ezt a vizsgálatot nevezzük hasított ideg (teased fiber) készítménynek.
A 3. mintát folyékony nitrogénben lehűtött izopentánban lefagyasztjuk és fagyasztott metszetet készítünk, amiket azonnal megfestünk és értékelünk.
HE készítményben jól látható a fascicularis szerkezete, a fasciculusok mérete, a rostok mennyisége az epineurális kötőszövet felszaporodása és a vasa nervorumok szerkezete, esetleges gyulladásos inflációja. A módosított Gömöri festés az idegrostok myelin hüvelyét festi meg kerék küllő-szerűen, vagyis ezzel a myelinált rostok tanulmányozhatók. PAS reakció elsősorban az erek megítélését segíti. Congo kongó festés polarizált fényben amyloid lerakódását jelezheti.
A félvékony metszeteken nagyon jól megítélhető az ideg fasciculusok rost összetétele, az axon károsodásra utaló „spheroidok” jelenléte, a vastag és vékony myelinisált rostok aránya, a regenerált rostok jelenléte.
A hasított ideg minta elsősorban a (multi)focalis demyelinisatio kimutatására alkalmas.
Az axon szerkezet, a myelin hüvely megítélése elektronmikroszkópos vizsgálattal lehetséges. ugyancsak látható a Schwann-sejtek mennyisége szerkezete esetleg kóros eltérései (felszaporodása zárványok hagyma levél szerkezet). Lehetőség van kapillárisok részletes értékelésére.
A polyneuropathia többnyire együttesen okozza a vékony és vastag idegrostok károsodását. Ritkán előfordul a vékony idegrostok szelektív károsodása amikor a vastag rost károsodásnak sem klinikai tünetei, sem ENG eltérése nincs. Az ENG vizsgálat nem alkalmas a vékony rostok vizsgálatára, a klinikai gyakorlatban erre a punch biopsziát alkalmazzuk.
Ennek során néhány milliméteres bőr biopsziát készítünk a külboka felett, majd a mintát egy specifikus neurofilament immunhisztokémiai jelölésnek vetjük alá (PGP 9.5).
Az értékelés során a hámban megszámoljuk az intraepidermális idegrostok mennyiségét (IENFD: intraepidermal nerve fiber density), az értéket korhoz és nemhez viszonyított normál értékekkel hasonlítjuk össze és ez alapján tudjuk megállapítani a vékonyra és neuropathia fennállását. Megítélhető a rostok morfológiája (degeneráció jeleként rövid rostok, kevéssé elágazó rostok, megvastagodások). Ugyancsak megvizsgáljuk a subepidermalis rostokat, valamint referenciaként a verejtékmirigyek körüli vegetatív rostokat.
Mivel az életkor előrehaladtával az IENFD csökken, így érthető, hogy a vizsgálat eredménye fiatal betegeknél egyértelműbb.